■ 產(chǎn)品介紹
Rosetta-gami系列菌株來源于Origami系列宿主菌，該系列菌株的有點除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突變提高含二硫鍵正確折疊蛋白的高效表達(dá)，同時含有Rosetta系列菌株中含有的真核細(xì)胞稀有密碼子。該菌株同時集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的優(yōu)點。Rosetta-gami(DE3)pLysS系列菌株含有pRARE質(zhì)粒，能夠提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA六個真核細(xì)胞中的稀有密碼子tRNA，能夠有效提升真核細(xì)胞蛋白的表達(dá)水平。pRARE質(zhì)粒具有氯霉素抗性。Rosetta-gami(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞同時具有氯霉素，卡那，鏈霉素和四環(huán)素四種抗生素抗性。Rosetta-gami(DE3)pLysS被建議使用于含有Bla標(biāo)記的氨芐抗性表達(dá)質(zhì)粒。當(dāng)使用pCDF系列載體時，還需要使用壯觀霉素(Spectinomycin)進(jìn)行篩選。菌株中 的rpsL突變使得該菌株具有鏈霉素抗性DE3是溶源性的 λDE3, 所以帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體，及其他T7啟動子系列載體。含有pLSs質(zhì)粒，pLySs質(zhì)粒能夠產(chǎn)生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平。pLySs質(zhì)粒使得該菌株具有氯霉素抗性。pLySs質(zhì)粒的起始復(fù)制位點是p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒能夠和pUC-及pBR322-衍生的質(zhì)粒互相共存。 |
基因型： | Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB::kan pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR) |
■ 產(chǎn)品特點
Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表達(dá)菌株的優(yōu)勢：
■ Rosetta-gami賦予其 Rosetta和Origami的優(yōu)點——補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應(yīng)的tRNA，提高外源基因的表達(dá)水平，并且包含突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它們是還原途徑的兩個關(guān)鍵酶，其突變有利于高效形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強(qiáng)蛋白的可溶性。
■ 該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)適合T7啟動子誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)。
■ 該菌株攜帶的pLysS質(zhì)粒含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)，適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株具有卡那霉素，氯霉素，鏈霉素，四環(huán)素抗性，為亮氨酸生長缺陷型菌株。
■ 使用方法
建議超凈臺內(nèi)劃線涂板，得到單克隆后再進(jìn)行其他實驗操作，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 本產(chǎn)品僅可用于實驗室研究，不能用于動物，人體以及作為食品添加劑等用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3. 使用甘油菌時可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固體瓊脂平板即可，也可完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，菌株的活力會逐漸下降。
